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原代細胞培養的分離注意事項有什么？

分離是原代細胞培養的重要步驟之一，那么你知道原代細胞培養的分離注意事項有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、組織塊培養法1.組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。2.加入的培養液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。3.當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產生的有毒物質會影響原代細胞的生長。4.為促進組織塊盡快粘貼在培養瓶皿上，可以在種植前...

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原代細胞取材的注意事項有哪些？

取材作為原代細胞培養過程中至關重要的一步，那么原代細胞取材的注意事項有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、皮膚和粘膜主要取皮片，面積一般2~4平方厘米。二、內臟和實體瘤1.無菌環境；2.熟悉所需組織的類型和部位；3.要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結締組織。三、血液細胞一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等)分離細胞，取材時應注意抗凝。四、骨髓、羊水、胸/腹水細胞嚴格無菌，注意抗凝，還要盡快分離培養，離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再...

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WB實驗常見問題有哪些？如何解決？

WesternBlot雖是實驗室zui常用的蛋白分析技術，但是由于它步驟繁瑣、操作流程長、影響因素多，所以導致在實驗過程中會遇到各式各樣的問題，那么你知道WB實驗常見問題有哪些呢？該如何解決呢？讓我們一起來看看吧！一、目標條帶沒有信號原因分析：1.樣品中可能含有蛋白酶，使蛋白樣品分解成小分子。2.目標蛋白濃度過低（低于檢測下線）。3.轉膜時間太短導致目標蛋白沒有充分轉移到膜上，或者轉膜時間過長導致樣品轉穿。4.一抗的特異性不佳，導致一抗無法識別目標蛋白。解決方法：1.添加蛋白...

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你知道RNA提取的實驗步驟是什么嗎？

RNA是目前發現細胞內生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時是DNA與蛋白質信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段，那么你知道RNA提取的實驗步驟是什么嗎？讓我們一起來看看吧！以Trizol法提取組織細胞為例：1.提取細胞RNA時，先離心沉淀細胞，每5~106個細胞加1mlTrizol后，反復用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細胞；2.將上述組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中，在室溫15~30℃下放置5分鐘；3.在上述EP管中，按照每1mlTri...

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RNA提取成功的要點有哪些？

RNA是目前發現細胞內生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時是DNA與蛋白質信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段。那么你知道RNA提取成功的要點有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！1.組織樣本要盡可能的新鮮，避免反復凍融。2.提取時組織要充分研磨，組織量不宜過少，更不宜過多。3.加入裂解液后應給予充分的孵育時間，使樣本充分裂解。4.在用Trizol法提取時，分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸，不能多吸”，千萬不能提取到中間層，否則會導致嚴重的基因組D...

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