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pei轉染試劑如何配置

更新時間:2023-04-23點擊次數:2773
 
  pei轉染試劑廣泛應用于多種細胞系包括293、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 Hela 細胞等。pei轉染試劑如何配置呢?
  一、pei轉染試劑配置前準備:
  (1)通過胰酶消化收集細胞,用適當的完q培養基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養皿上(根據實驗需要選擇培養皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養皿面積的70-90%)。
  (2)根據細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完q后即可開始轉染。
  (3)轉染前換入2mL預熱的無血清培養基。
  二、配置PEI-DNA混合物
  以60mm組織培養皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后于室溫靜置20-30min。
  三、pei轉染試劑配置后細胞孵育
  將420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。
  注:每次用100μM的核酸PEI轉染試劑儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。
  四、pei轉染試劑配置后細胞培養
  培養6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養基,繼續培養,16h左右可以觀測到報告基因的表達。
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